Basada en la galardonada saga de videojuegos del mismo nombre, creado por la empresa danesa IO Interactive, Hitman – Agente 47 narra la historia del asesino profesional conocido solo como el Agente 47 (Timothy Olyphant), quien fue genéticamente creado mediante clonación y, desde su juventud, ha sido entrenado para ser un letal, frío y calculador asesino con unos niveles de resistencia, velocidad e inteligencia inimaginables. Después de ser contratado por un grupo conocido solo como 'La Organización', el Agente 47 queda atrapado en una conspiración política y pasa de ser el cazador, a ser el cazado. Ahora perseguido por el ejército ruso y la Interpol, huye a través de Europa del Este con la esperanza de descubrir quién lo engañó y por qué. Sin embargo, su creciente apego a una joven hermosa pero traumatizada representa una amenaza tan grande para su supervivencia como la de la Interpol y los agentes rusos que lo persiguen.
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