Anthony Mackie nació el 23 de septiembre de 1978 en Nueva Orleans, Louisiana, EE. UU. Ha aparecido en largometrajes, series de televisión y obras de Broadway y Off-Broadway, incluyendo Black Bottom de Ma Rainey, Drowning Crow, McReele, A Soldier's Play y Talk, de Carl Hancock Rux, por la que ganó un Obie Award en 2002.

En este mismo año, apareció en la película debut de Eminem, 8 Mile: Calle de las ilusiones, interpretando a Papa Doc, un miembro de Leaders of the Free World. Fue nominado al Mejor Actor de Reparto en los Independent Spirit Awards (ISA) por su papel en Zona de miedo (2009). Esa fue la segunda nominación de ISA de Mackie, la primera fue en 2003 por su trabajo en Brother to Brother.

El mismo año de su segunda nominación al ISA, Mackie interpretó al rapero Tupac Shakur en la película Notorious (2009). Dos años después apareció junto a Matt Damon, en Agentes del destino (2011), donde interpreta a Harry Mitchell, miembro comprensivo de un sombrío grupo sobrenatural que controla el destino de todos los humanos. 

Mackie obtuvo mucha más popularidad entre la crítica y el público luego de interpretar al superhéroe Falcon en Capitán América: el soldado invernal, Capitán América: Guerra civil, El Hombre hormiga y Vengadores: la era de Ultrón.

Se casó con novia de la juventud, Sheletta Chapital, en 2015. Tienen tres hijos.