Tyler Labine y sus hermanos Cameron y Kyle tomaron la cámara de video familiar y comenzaron a hacer películas en su infancia. Pronto buscaron representación profesional y rápidamente convirtieron su afición en una profesión. La familia se mudó a Vancouver en 1991 y Labine comenzó a tener una gran demanda. Tuvo su primer crédito en pantalla en 1991, con un papel como invitado en el drama legal canadiense Street Legal. Uno de sus papeles más reconocidos es el de Dale en la película de comedia y terror Tucker y Dale luchan contra el mal (2010). En la última década, Labine participó en numerosos proyectos televisivos como la comedia Mad Love (2011) de CBS, la serie de comedia Animal Practice (2012) de NBC y el programa de Hulu Deadbeat (2014-2016). Desde 2018, Labine interpreta el papel del doctor Iggy Fromeen el drama médico de NBC New Amsterdam, un drama desarrollado en los pasillos de un hospital que sigue al nuevo director médico del hospital público más antiguo de Estados Unidos mientras rompe las reglas para sanar el sistema.