Francesco Pannofino comenzó su carrera en la década de 1980. Como actor, Pannofino apareció en muchas películas y programas de televisión, como Giovanni Falcone - L'uomo che sfidò Cosa Nostra (2006), en la que interpretó al gángster de la vida real Tommaso Buscetta. También apareció en Night Bus (2007), protagonizada por Giovanna Mezzogiorno y Valerio Mastandrea, así como en la película para televisión Imperium: Pompeii (2007). Como actor de doblaje, Pannofino dobló numerosos personajes al idioma italiano y prestó su voz, entre muchos otros, a los actores George Clooney y Denzel Washington. El actor también ganó reconocimiento por su participación como René Ferretti en la serie Boris (2007-2010), una sátira hacia la producción televisiva generalista italiana de principios de los 2000, y la película derivada del 2011. Pannofino regresa este personaje en 2022 para la reactivación de la cuarta temporada de la serie.