Mientras se especializaba en teatro en la Universidad de Wisconsin, Jane Kaczmarek se hizo amiga de Tony Shalhoub, quien la animó a inscribirse en la Universidad de Yale para continuar sus estudios. Después de actuar en la Yale Repertory Company, Kaczmarek tuvo varios éxitos cinematográficos y teatrales, incluido su papel como reemplazo de Mercedes Ruehl en la obra de Broadway de Neil Simon, Lost In Yonkers. Aunque empezó a aparecer en variedad de proyectos televisivos y de cine desde los años ochenta, la actriz consiguió el estrellado hasta el nuevo milenio cuando fue elegida para interpretar a Lois, la madre del personaje titular, en Malcolm el de en medio (2000-2006). Gracias a este papel, Kaczmarek fue aclamada por su talento cómico y la llevó a ser nominada a tres nominaciones al Globo de Oro y a siete Primetime Emmy. Tras el término de la serie, la actriz hizo apariciones especiales en numerosas series y películas, además de mantenerse activa como actriz de doblaje.